Abstract

El virus de la necrosis pancreática infecciosa (IPNv) es el agente etiológico de una enfermedad de distribución mundial que provoca severas pérdidas económicas en varias especies de peces, principalmente en salmónidos jóvenes. Su genoma consiste en dos segmentos de ARN bicatenarios lineales que codifican cinco proteínas virales que se denotan como VP 1-5. Particularmente, VP5 es una proteína no estructural que se produce en pequeñas cantidades solo en células infectadas y cuya función continúa siendo incierta. Esta molécula presenta dominios de homología con la familia de proteínas Bcl-2 inhibiendo la apoptosis durante la replicación temprana de IPNV. El uso de la bioinformática estructural identificó, potenciales motivos expuestos de reconocimiento de la familia de quinasas serina/treonina PKC. En este contexto, el objetivo de este estudio fue evaluar la contribución de la interacción entre VP5 y PKC a la señalización apoptótica inducida por la infección con IPNv in vitro. Las células CHSE-214 fueron transfectadas con diferentes concentraciones del plásmido pCMV-HA-VP5 y tratadas con calphostina C, un potente inhibidor de PKC. La técnica RT-qPCR se usó para evaluar los niveles de expresión de VP5. La supervivencia celular se monitoreo a través de ensayo del MTT y la actividad apoptótica inducida por los distintos tratamientos se evaluó mediante la cuantificación de la actividad de la Caspasa-3. La utilización de calphostina-C, evitó la fosforilación e interacción de VP5-PKC en las células transfectadas. Adicionalmente, el nivel de apoptosis intrínseca inducida disminuyó de forma significativa conforme se generó el dímero VP5-PKC, por el contrario, un resultado inverso se obtuvo cuando los motivos de reconocimiento de PKC en VP5 fueron modificados. Nuestros datos sugieren que la putativa unión de VP5 a PKC puede ser responsable, en parte, de la disminución de la apoptosis observada en etapas tempranas durante la infección por IPNv.