Abstract

En la acuicultura, unas de las herramientas terapéuticas utilizadas son los antimicrobianos, dentro de estos se encuentra la enrofloxacina (EFX), fluoroquinolona de uso exclusivo veterinario. En la actualidad, existe cierta controversia a nivel mundial sobre el uso de estos compuestos en animales de consumo humano, no sólo por la presencia de residuos farmacológicos en tejidos comestibles, sino también por la selección de cepas bacterianas resistentes, es por ello la importancia de generar metodologías analíticas sensibles en la determinación de estos compuestos en los tejidos comestibles de los peces. El objetivo del estudio fue desarrollar un tratamiento de muestras y una metodología analítica para la determinación de EFX y su metabolito principal ciprofloxacina (CFX) en músculo y piel de trucha Arco íris (O. mykiss). Para la preparación de muestras, se agregaron 300 mg de tejido (músculo o piel) y 300 μl de tricloroacético al 50%, se homogenizó el conjunto mecánicamente por 5 min, se sometió a vortéx por 2 min, se mantuvo a 4°C por 12 h y se centrifugó. Luego, se extrajo 150 μl del sobrenadante, agregándole 150 μl de concentraciones conocidas de EFX o CFX (0,0012 a 1,25 μg/ml), 600 μl de metanol, 50 μl de estándar interno (difloxacina 5 μg/ml), se centrifugaron a 13.500 rpm por 5 min, inyectando 100 μl al HPLC. Las determinaciones se realizaron por HPLC con detector de fluorescencia (Em: 277 nm y Ex: 418 nm), con una fase móvil compuesta por agua de ionizada, acetonitrilo y trietilamina (790:200:10) a flujo continuo de 0.8 ml/min. La validación de la técnica analítica se realizó en base a las directrices de la farmacopea USA USP-NF-2008, determinando linealidad por medio de una regresión lineal entre las concentraciones conocidas y los cocientes de las áreas bajo la curva observada en el cromatograma tanto para los analitos en estudio y el estándar interno. Se determinaron los límites de detección (LD) y cuantificación (LQ), ensayos de precisión intradía (por sextuplicado) e interdía (por 6 días) y recuperabilidad. Se estableció linealidad para la curva de calibración tanto de EFX y su metabolito en las diferentes matrices. Se obtuvo un LD para EFX de 0.001 μg/g, LQ de 0.003 μg/g y para CFX un LD de 0.002 μg/g y LQ de 0.005 μg/g, para músculo y piel, respectivamente. El tiempo de retención para EFX fue de 4,19 ± 0.17 min y para CFX de 5.81 ± 0.18 min. Los coeficientes de variación observados en los ensayos de precisión para EFX fueron ≤ 3.3% y para su metabolito fueron ≤ 2.45%, mientras que el porcentaje de recuperabilidad de EFX fue de 94.2 ± 4.1 % y 95.1 ± 1.2 %, para músculo y piel respectivamente. Mientras que para CFX para ambos tejidos registra una recuperabilidad 94.7 ± 2.7%. Los resultados obtenidos proponen que el tratamiento de muestra y la técnica analítica desarrollada es sencilla, eficiente, sensible y útil para el desarrollo de futuros estudios depleción tisular y para determinar residuos farmacológicos, tanto para EFX y su metabolito en músculo y piel de trucha Arco íris.