Abstract

Introducción: Nuestro grupo ha reportado previamente una asociación entre sensibilidad a quimioterapia y la expresión de proteínas MDR (P-Gp y MRP1) en líneas celulares y cultivos primarios de cáncer de próstata, quedando por estudiar la actividad de las mismas. Material y métodos: Se utilizó líneas celulares de cáncer de próstata PC3 y DU145. Se evaluaron los niveles de mARN de P-Gp y MRP1 mediante RT-PCR. La expresión de ambas proteínas se determinó mediante inmunofluorescencia. Se estableció un ensayo funcional en base a la acumulación de sustratos fluorescentes (DiOC2(3) para P-gp y CFDA para MRP1) y al uso de inhibidores específicos para cada proteína (Ciclosporina A para P-Gp y MK571 para MRP1). Las células se incubaron durante 60 minutos a 37ºC con o sin el inhibidor específico, seguido de otra incubación por 60 minutos agregando el sustrato fluorescente. La acumulación del sustrato fluorescente se determinó por citometría de flujo. Resultados: Las líneas celulares utilizadas sólo expresaron MRP1, mientras no se detectó P-Gp (mARN ni proteína). Mediante el ensayo funcional se observó que las células acumulaban más CFDA cuando eran tratadas con MK571. No se observó diferencias en la acumulación de DiOC(2)3 frente al tratamiento con Ciclosporina A. Conclusión: La mayor acumulación intracelular de CFDA frente al tratamiento con MK571 indica que la proteína MRP1 expresada en las líneas celulares utilizadas es funcional. P-Gp no se expresa en las líneas evaluadas. En estudios en curso nos encontramos evaluando la expresión y función de ambas proteínas en cultivos primarios.