Abstract

Las enfermedades inflamatorias crónicas, como hipertensión, insuficiencia cardiaca y aterosclerosis se caracterizan por una desregulación del proceso inflamatorio, el que se perpetúa por sobreproducción de mediadores proinflamatorios como TNF-α, IL-1β, IL-6 y prostaglandinas y activación del factor transcripcional NF-κB, entre otros. Los fibroblastos cardiacos son un tipo celular crucial en la mantención estructural y funcional del tejido cardiaco. Actúan como “células centinelas” censando el ambiente proinflamatorio, y son los responsables de producir matriz extracelular (MEC) para reparar el daño tisular despúes de una injuria al corazón. El rol de los fibroblastos cardiacos se ha estudiado en sepsis y su estudio es relevante patologías asociadas a fibrosis e inflamación. Ugni molinae Turcz., myrtaceae, es un arbusto nativo del centro y sur de Chile y de zonas aledañas de Argentina. Sus hojas se han utilizado en la medicina tradicional como antiinflamatorio y analgésico de las vías urinarias. Sus extractos foliares tiene efectos farmacológicos comprobados, tales como actividad analgésica y antiinflamatoria in vivo, capacidad antioxidante y actividad antibacteriana sobre microorganismos de interés clínico, entre otros. Estas propiedades son atribuidas a la presencia de triterpenos pentacíclicos y compuestos fenólicos. La gran variedad genotípica que caracteriza a esta especie es responsable de los diferentes perfiles en cuanto a composición química de los extractos foliares de murtilla. Objetivo: Evaluar el efecto de extractos de hoja de dos genotipos distintos de murtilla, EET22-1 (extracto etanólico) y EAE23-2 (en acetato de etilo), sobre la viabilidad celular, y activación de NFκB (fosforilación de la subunidad p65), y sobre los niveles proteicos de interleuquina-1β (IL-1β). Metodología: Los extractos EET 22-1 y EAE23-2 se prepararon a partir de hojas secas y molidas de dos genotipos elegidos por su mayor capacidad antiinflamatoria in vivo y su capacidad antioxidante, por extracciones seriadas con solventes. El cultivo de fibroblastos de corazón de rata se preparó a partir de corazón de rata neonata, y mantenido en medio DMEM/F-12 con 10% suero fetal bovino. Las células se estimularon con lipopolisacárido de E. coli (LPS) 1μg/mL por 24 hrs en ausencia y presencia de extracto (0,1-1-10 y 100 μg/mL). Se ensayó viabilidad celular por bromuro de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol (MTT), niveles proteicos de IL-1β y fosforilación de p65 por Western blot. Estadística: ANOVA de una vía, post test de Tukey, p < 0,05. Resultados: Ambos extractos no produjeron muerte celular hasta los 10 μg/mL, sin embargo EAE 23-2 disminuyó significativamente la viabilidad al 20% a los 100 μ/mL, y EET 22-1 la disminuyó al 36% a los 500 μg/mL, en relación al control sin extracto. No se observaron diferencias significativas con pre y post tratamiento de los respectivos extractos a 10 μg/mL en los niveles de fosforilación de p65 y de IL-1β, comparados con el control de inflamación (LPS 1μg/mL). Conclusiones: EET22-1 resultó más tóxico que el EAE23-2, esta variación probablemente se deba al diferente perfil químico de ambos, ya que el extracto en acetato de etilo tiene mayor concentración de triterpenoides, en cuanto a que se ha reportado toxicidad celular por ácido ursólico. Los extractos estudiados no revirtieron ni previnieron la respuesta inflamatoria inducida por LPS. Este estudio se está complementando con la evaluación de actividad óxido nítrico sintasa medida por producción indirecta de nitrito y evaluación de niveles de ciclooxigenasa-2 (COX-2).