Abstract

Levaduras aisladas desde suelo trumao fueron taxonómicamente identificadas por PCR-RFLP y secuenciación de la región 5.8S del gen rDNA y los espaciadores transcritos internos (ITS). La PCR fue realizada con los cebadores específicos (ITS1, ITS4), amplificando la región 5.8S-ITS del gen rDNA, generando un producto de amplificación variable entre las distintas cepas de levadura, una posterior digestión se realizó con endonucleasas de restricción: CfoI, HaeIII y HinfI. Adicionalmente se realizó la identificación convencional siguiendo los criterios descritos por Barnett y col. (1990), asimilización y ferementación de azúcares y fuentes de nitrógeno. Los análisis de PCR-RFLP mostraron distintos tamaños de la región 5.8S-ITS, entre 421 y 678 pb permitiendo establecer 10 perfiles de restricción (10 grupos). El tamaño de los productos de PCR como los perfiles de restricción generados con las endonucleasas se comparó con patrones de restricción disponibles en la literatura, permitiendo identificar solamente 4 grupos de cepas, básicamente porque aún no han sido reportados patrones de RFLP para muchas levaduras. La secuenciación de la región 5.8S-ITS del rDNA permitió comparar las secuencias de nuestras cepas con las secuencias disponibles en la base de datos GenBank y mediante el uso de BLAST y ClustalW fue posible encasillar las cepas en los siguientes taxas (todas por sobre un 98% de identidad): Candida saitoana, Candida sp., Devariomyces hansenii, Kazachstania exigua, Nadsonia fulvescens, Pichia fermentans, Tricosporon ducitum, Tricoporon lignícola, Tricosporon middelhovenii, Tricosporon sp. Los resultados de secuenciación muestran correspondencia con lo identificado anteriormente por PCR-RFLP. Al comparar las técnicas moleculares con las pruebas convencionales, se demostró que existe concordancia en cuanto a la identificación de levaduras de suelo trumao. Cabe mencionar que PCR-RFLP se presenta como un método rápido, fiable y económico de identificación de levaduras de suelo.