Abstract

Introducción: Las enfermedades producidas por micobacterias son de gran importancia clínica y epidemiológica. El complejo Mycobacterium tuberculosis (CMT ) corresponde a patógenos obligados con una mayor morbi-mortalidad a diferencia de las micobacterias no tuberculosas (MNT ) que generalmente actúan como patógenos oportunistas en pacientes inmunocomprometidos, provocando gran variedad de entidades clínicas como afecciones cutáneas, ganglionares y pulmonares cuya incidencia global se ha incrementado globalmente. Sin embargo, existen MNT no relacionadas con enfermedades en humanos y que frecuentemente son contaminantes de muestra clínicas, por lo que es imperativo un método diagnóstico para la identificación a nivel de especies para conferir una significancia clínica a un aislamiento micobacteriano. La identificación tradicional de las micobacterias está basada en sus características bioquímicas y fenotípicas mediante procesos lentos, laboriosos e incapaces en algunos casos de distinguir entre especies. Actualmente la mayoría de las técnicas usadas en la identificación de micobacterias están basadas en métodos moleculares (considerado como el gold standard) que a pesar de su gran exactitud y precisión se caracterizan por ser de alto costo y estar confinados a laboratorios de referencia. La espectrometría de masas basada en Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass (MALDI-TOF) es una espectrometría de ionización suave que se basa en la comparación del espectro producido por una muestra en particular con una base de datos de referencia. MALDI-TOF ha sido utilizado en la identificación de bacterias y levaduras y se ha caracterizado por ser un método barato, rápido y simple además de que puede ser implementado en laboratorios de microbiología general. Objetivo: Evaluar el rendimiento de MALDI-TOF en la identificación de micobacterias en comparación con métodos moleculares. Material y métodos: Se analizaron 28 aislamientos de MNT (24) y CMT (4) con identificación confirmada por el Instituto de Salud Pública de Chile (19 cepas) y por el Colegio de Patólogos Americanos (9 cepas). Las muestras fueron cultivadas en medio líquido y fueron procesadas según el protocolo recomendado por Bruker Daltonik GmbH para MALDI Biotyper. Se realizó primariamente una inactivación por calor y luego extracciones sucesivas utilizando esferas de zircón/sílice, dos centrifugaciones sucesivas y finalmente ácido fórmico y acetonitrilo. El análisis se realizó en el equipo MALDI Biotyper, Bruker utilizando la librería para micobacterias. Se consideró un score ≥1.8 para identificación a nivel de género y especie. Resultados: Mediante el método de MALDI-TOF, se identificaron correctamente un 79% de las cepas (22/28). La identificación fue concordante en el 100% (9/9) de las especies de crecimiento rápido (4 del complejo M. abscessus/chelonae, 2 del complejo M. fortuitum, 2 M. mucogenicum y 1 M. neoaurum). En las especies de crecimiento lento, la identificación fue correcta en el 68% (13/19) siendo 5 del complejo M avium/intracellulare, 4 del complejo M. tuberculosis, 2 M. gordonae, 1 M. kansasii y 1 del complejo M. terrae. Las 6 especies que no pudieron ser identificadas correspondieron al complejo M avium/intracellulare. En los 6 casos no se obtuvo score, por lo que no correspondieron a falsas identificaciones. Conclusiones: Los puntos críticos en la identificación de micobacterias mediante MALDI-TOF y que pueden afectar la tasa de identificación son las posibles interferencias de los medios líquidos utilizados, el proceso de inactivación, así como la necesidad de alta cantidad de biomasa para su ejecución. Debido a las características cosmopolitas de MNT no productoras de enfermedad, es necesario un método para su identificación rápido, para así otorgar una significancia clínica a un cultivo positivo de micobacterias.