Desarrollo de una plataforma para evaluar la expresión de genes codificantes para 2,4-diacetilfloroglucinol, pioluteorina y pirrolnitrina en Pseudomonas protegens, mediante qPCR

Ruiz, Braulio; Vega, Yessenia; Moya-Elizondo, Ernesto

Abstract

Pseudomonas protegens es responsable de la supresión natural de enfermedades producidas por patógenos a través de la producción de los antibióticos 2,4-diacetilfloroglucinol (2,4 DAPG), pioluteorina y pirrolnitrina. Estas bacterias se encuentran de forma nativa en suelos chilenos y tienen gran potencial agroindustrial, dado que su inoculación promueve el control de enfermedades y promueve el crecimiento de las plantas. Se estandarizó un método para cuantificar la expresión de los genes que codifican para 2,4 DAPG (phl), pioluteorina (plt) y pirrolnitrina (prn) a través de cebadores específicos reportados para P. protegens, y se evaluó la expresión de estos genes durante el co-cultivo con el bioproducto Nacillus® WP. Se utilizó la cepa de P. protegens Ca2, la cual creció en caldo King B, en caldo KB con la adición de Nacillius® WP (1.5 g·L-1) y en caldo LB Lennox como control. A las 24 horas de crecimiento se extrajo ARN de 2 mL de cultivo celular y se sintetizó ADNc. Se utilizó el gen ARNr 16S como gen endógeno y se cuantificó la expresión relativa mediante el método ΔΔCt. La cepa de P. protegens, crecida junto con Nacillus® WP en KB, expresó los genes que codifican para enzimas participantes en la biosíntesis de los antibióticos, alrededor de 40 veces más que en el control. Con esta metodología molecular es posible evaluar la producción de compuestos antimicrobiales de P. protegens sobre diferentes sustratos, lo que permite desarrollar bioformulados con esta bacteria benéfica.

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Fecha de publicación: 2019