Abstract

La enzima L-asparaginasa II, que hidroliza L-asparagina en ácido aspártico y amonio, es utilizada actualmente como agente quimioterapéutico en el tratamiento de diversas enfermedades, debido a su efecto antineoplásico sobre ciertos tipos de células tumorales. A pesar de su rol exitoso en el tratamiento, su uso es constantemente reevaluado ya que genera efectos secundarios adversos, asociados a una actividad inespecífica hacia un segundo sustrato, glutamina. Entre los organismos que producen esta enzima, las bacterias marinas del orden actinomycetales son de gran interés, ya que se han descrito L-asparaginasas II sin actividad glutaminasa. Dada la necesidad por encontrar nuevas asparaginasas con baja o nula actividad glutaminasa es que se estudió una L-asparaginasa II descrita en el genoma de la actinobacteria Salinispora tropica CNB 440 que hasta el momento no ha sido caracterizada. Para ello el gen codificante para la enzima L-asparaginasa II fue amplificado a partir del genoma de S.tropica CNB 440 y clonado en el vector de expresión pET22b(+), con el que se transformó cepas de E.coli BL21(DE3). Posteriormente se indujo con IPTG la expresión del constructo en células co-transformadas, produciendo la proteína. Se evaluóó la actividad de la enzima L-asparaginasa II mediante Nesslerización, a partir de extractos crudos, para los sustratos L-asparagina y L-glutamina, aproximando una actividad específica asparaginasa de 117,81 U/mg, y sin observar actividad glutaminasa significativa. Dado los prometedores resultados para trabajo futuro se sugiere la evaluación de la actividad de la enzima purificada y su caracterización.