Abstract

La imagenología óptica es una importante herramienta para el estudio de la progresión de enfermedades como el cáncer. En estos estudios, las proteínas fluorescentes ofrecen una gran ventaja sobre otros marcadores. Uno de los parámetros importantes que considera la imagenología es maximizar la profundidad de penetración de los fotones en el tejido celular, efecto logrado en la región del infrarrojo cercano (NIR). Nuestro objetivo fue generar líneas celulares estables de cáncer de próstata (CaP) que expresen proteínas fluorescentes infrarrojas (pIRFs) a través de transferencia lentiviral, para utilizarlas posteriormente en investigaciones de progresión tumoral in vivo. Los plásmidos de transferencia lentiviral que median la expresión de IRFP fueron generados a partir de las secuencias codificantes para IRFP de los plásmidos pCMV/IRF670 y pCMV/IRF682, las cuales fueron subclonadas en el plásmido pLCW. La producción de partículas lentivirales (pLv-pLCW/IRF70 y 682) se realizó mediante co-tranfección de los plásmidos pLP1, pLP2 y pLP-VSVG en células HEK293-FT. Para la generación de las líneas celulares estables de CaP que expresan IRFP, se transdujeron células de CaP con pLv-pLCW/IRF670 y pLv-pLCW/IRF682 y se seleccionaron clones mediante citometría de flujo de Cell Sorting. Para estudios in vivo se inocularon células transformadas en ratones machos inmunodeficientes, generando tumores de fluorescencia infrarroja visible en el equipo LI-COR Pearl impulse. Nuestros resultados indican que poseemos líneas celulares estables de CaP que expresan ambos trazadores IRFP y que además permitirán realizar estudios de progresión tumoral en CaP in vivo