Abstract

METODO PARA EXTRAER ADN, LIBRE DE INHIBIDORES ENZIMATICOS, CON CALIDAD OPTIMA PARA SU AMPLIFICACION POR PCR Y REPRESENTATIVO DE LA COMUNIDAD MICROBIANA, A PARTIR DE MUESTRAS LIQUIDAS O SOLIDAS, OBTENIDAS DE PROCESOS INDUSTRIALES PRODUCTIVOS DE COBRE QUE USEN BIOLIXIVIACION Y CONTENGAN BAJA CONCENTRACION CELULAR, PARA SU USO POSTERIOR EN APLICACIONES DE BIOLOGIA MOLECULAR, QUE COMPRENDE: A. PROCESAR EN EL CASO DE MUESTRA SOLIDAS EL MINERAL POR CENTRIFUGACION Y TRATAMIENTOS SUCESIVOS CON SOLUCIONES DE H2SO4 (0,01-0,5 N) Y 0,05-1,0 % DE TWEEN 20 PARA SEPARAR PRIMERO LAS BACTERIAS ADHERIDAS AL MINERAL Y PARA OBTENER LUEGO UNA SUSPENSION CELULAR CON LA MENOR CANTIDAD POSIBLE DE MATERIAL FINO, EN EL CASO DE MUESTRA LIQUIDAS ESTA ETAPA NO SE REALIZA; B. FILTRAR LA SUSPENSION CELULAR OBTENIDA EN FILTRO DE MEMBRANA DE 0,22 MICROMETROS O MENOR; C. LAVAR LA MEMBRANA EN FORMA SECUENCIAL CON 50 ML DE H2SO4 (0,01-0,5 N), LUEGO SE SIGUE CON 50 ML DE LA SOLUCION DE CITRATO DE SODIO (0,1-50 MM), PH ENTRE 1,0 Y 3,0, FINALMENTE SE NEUTRALIZA CON 50 ML DE BUFFER TE-CITRATO PH ENTRE 5,0-10,0; D. RUPTURA DE LAS CELULAS A TRAVES DE TRATAMIENTO QUIMICO Y ENZIMATICO CON LISOZIMAS, SDS Y PROTEINASA K; E. EXTRACCION DE ADN SEGUN KIT SELECCIONADO DE USO COMERCIAL.