Abstract

INTRODUCCIÓN: En las células epiteliales intestinales la secreción y absorción de fluidos es posible por el movimiento paracelular de Na+ y Cl- . Los iones cloruro se acumulan sobre su equilibrio electroquímico a través del triple cotransportador NKCC1 y los intercambiadores Cl- /HCO3- . La salida apical de Cl- tiene dos componentes; la secreción dependiente de AMPc y una dependiente de Ca2+. Mientras la secreción dependiente de AMPc es mediada por CFTR, aún existe controversia por la existencia de la secreción de Cldependiente de Ca2+ en el intestino. Estudios previos destacan que pacientes con Fibrosis Quística, la existencia de secreción de cloruro dependiente de Ca2+ se correlaciona con síntomas menos severos. Sorpresivamente en ratones CF, las vías aéreas no se ven afectadas debido a la existencia de un canal de cloruro activado por calcio conocido como TMEM16A. A diferencia de las vías aéreas, la función de TMEM16A en el intestino no ha sido completamente identificada. OBJETIVO: Estudiar el papel de TMEM16A en la secreción aniónica intestinal en ratones genéticamente modificados. MÉTODOS: Se utilizaron animales CB57BL/6, Cftrfl/fl/Villincre/- , Tmem16afl/fl/Villincre/- y Cftrfl/fl/Tmem16afl/fl/Villincre/- (doble mutante intestinal). Se obtuvieron muestras de tejido intestinal (íleon y colon) epitelial y de músculo liso y se determinó la expresión de proteína y mensajero para TMEM16A y estudios en cámara de Ussing para estudiar la secreción. Finalmente se realizó una inmuno-detección de mucinas (Muc2) en muestras intestinales. RESULTADOS: La expresión relativa de Tmem16a fue mayor en músculo liso que en epitelio, destacando la mayor expresión en el colon proximal. A nivel de proteína TMEM16A se detectó en todas las muestras de músculo liso, sin embargo, está ausente en todas las muestras de epitelio. La ausencia de TMEM16A no afecta secreción aniónica en los estudios funcionales. La ausencia de CFTR afecta la homeostasis del mucus, Muc2 se acumula en las criptas, sin embargo, la ausencia de TMEM16A muestra una localización de Muc2 similar a muestras de animales silvestres. Finalmente la ausencia de TMEM16A no afectó la sobrevida de los animales. CONCLUSIÓN: A pesar de que hay expresión de mensajero para TMEM16A en el epitelio intestinal, no fue posible identificar la proteína. Los estudios funcionales muestran que la ausencia del canal no afecta la secreción aniónica ni la homestasis del mucus y tampoco produce letalidad. En resumen, TMEM16A no es necesario para la secreción aniónica del intestino en ratones.