Abstract

Danofloxacina es una fluoroquinolona de segunda generación utilizada sólo en Medicina Veterinaria que desarrolla acciones bactericidas sobre Gram negativos y micoplasmas al afectar la enzima ADN-girasa bacteriana. En la actualidad no se admite la administración de fluoroquinolonas en aves de postura aunque suelen aplicarse en presencia de enfermedades infectocontagiosas que desafíen la vida de los animales. Este estudio se realizó con la finalidad de desarrollar una metodología analítica para determinar danofloxacina en clara y yema de huevos, estudiar la depleción en los compartimentos comestibles y estimar un eventual periodo de retirada. Se utilizaron gallinas ponedoras Rhode Island Red (N= 15), de 1.5 ± 0.2 kg de peso, clínicamente sanas y en pico de postura (85 ± 15%). Las aves fueron alojadas en jaulas individuales con alimento balanceado y agua ad libitum, temperatura ambiente de 21.2 ± 1.8°C. Luego de un periodo de adaptación recibieron 6.7 mg/kg de danofloxacina en el agua de bebida durante 11 días. Concluida la administración, diariamente y durante 15 días se colectaron huevos de cada animal, se separaron clara y yema, se identificaron por ave/día y almacenaron a -20 °C hasta su análisis. La extracción del analito se concretó utilizando 200 µL de muestra, 200 µL de agua, 800 µL de una solución de metanol:agua:ácido perclórico 50:50:2 v/v/v y 20 µg de una solución de 10 ug/ml de norfloxacina como estándar interno. El conjunto se agitó con vortex durante 30” y luego se centrifugó a 13500 rpm a 4° C durante 25’. La separación y cuantificación se realizó por HPLC mediante elusión isocrática en fase reversa, utilizando columna C-18 y detector de fluorescencia establecido a 295 nm de excitación y 490 nm de emisión, fase móvil compuesta por agua, acetonitrilo y trietilamina (79:19:1 v/v/v) ajustada a pH 3. Utilizando áreas de picos de concentraciones conocidas, se calcularon por regresión lineal simple las concentraciones de las muestras problema, según Nows & Ziv (1976). Los resultados del ensayo de validación del método revelan que el procedimiento utilizado es sencillo, rápido, suficientemente sensible para aplicar en programas de monitoreo y control de residuos y es poco contaminante debido que requiere escasa cantidad de solventes. La metodología empleada permite cuantificar el fármaco hasta los días 9 y 15 en clara y yema, respectivamente. Los niveles encontrados son más significativos en yema acorde la liposolubilidad de danofloxacina y el tiempo requerido por cada compartimento del huevo para su formación. El análisis de los datos obtenidos de depleción en cada compartimento versus tiempo, analizados con el programa Wt 1.4 de la EMEA conjeturando un riguroso Límite Máximo de Residuos (0.001 µg/kg), debido que éste no fue establecido en huevos para danofloxacina, se estimó un periodo de retiro de 24 y 28 días para clara y yema, respectivamente.